以终为始，全面控制生化测定及其外包的风险

发布日期：2022-09-15 12:37 浏览次数： 作者：admin

       凡事预则立，不预则废。例如，当你准备撰写论文时，才发现测定数据不可靠、不真实或者不可用，那就非常被动了，只能重新准备样本，再次进行测定，结题和毕业很可能都被迫延期。
       如何“预”？
       非常重要的就是，以终为始，厘清并控制测定及其外包的各种风险（始），才能“轻松、及时拿到可靠、真实和可用的测定数据”（终）。
       以生化测定为例。可靠是指测定数据可靠地反映所研究生物学现象与某种代谢的关系，即该生物学现象产生的代谢机制。真实是指测定数据反映了所测定样本中生化测定指标的真实状况。可用是指根据测定数据能够得出明确、可靠的研究结论，并发表高水平的研究论文，包括：（1）变异系数较小，（2）测定值未明显偏离文献报道，（3）处理组和对照组差异显著，（4）呈现明显的变化趋势，（5）不同测定指标的变化趋势能够相互验证和相互配合。及时是指按计划完成全部测定工作，并且拿到可靠、真实和可用的测定数据，从而优质结题和顺利毕业。轻松是指样本准备和测定的综合成本低，综合成本包括：（1）费用，（2）时间，（3）精力，从而有足够的时间和精力，用来阅读文献、设计研究方案和撰写研究论文。
       就生化测定而言，“预”就是厘清并控制好样本准备和测定两个阶段不同风险点；就生化测定外包而言，“预”就是厘清测定方式和测定外包公司选择，以及与测定外包公司交流的风险点！
       值我司11周年庆之际，谨以此文奉献给各课题组，祝大家优质结题和顺利毕业！
 
1. 准备生物样本阶段的风险
       质可靠、数合理和量充足的生物样本，是顺利完成生化测定，并保证生化测定数据可靠、真实和可用的前提。
风险1：生物样本的质不可靠
       生物样本的质包括：（1）遗传背景是否清晰无误，种、品种和细胞系（株）是否混淆，转基因是否成功转入和表达，基因敲除是否成功等；（2）对照组和处理组，尤其是对照组，不同个体的生长发育是否整齐；（3）与对照组相比，处理组是否出现预期的生物学现象；（4）取样是否具备典型性、代表性和重复性；（5）在储存和运输过程中是否变质，尤其是拟测定指标（含量或者活性）是否发生显著变化。
       质可靠的生物样本，才能保证生化测定数据可靠地反映了所研究的生物学现象是否与某种代谢相关，即生化测定数据的可靠性，从而避免因为质不可靠而不得不重新准备生物样本，不能轻松、及时拿到生化测定数据。
       取样具备典型性，即处理组与对照组在所研究的生物学现象上存在显著差异，生化测定数据才可能存在显著差异。取样具备代表性，即所取样本能够代表对照组和处理组各自的整体状况，生化测定数据才能可靠地反映对照组和处理组在某种代谢上的差异。取样具备重复性，即同一组内同一取样时间点所取的重复样本的差异小，才能有效降低生化测定数据的标准误，从而缩小其变异系数，避免因为标准误过大而在差异显著性检验中得出差异不显著的错误结论。
       通过预实验，可以保证生物样本的质可靠：（1）观察对照组的生长发育情况，（2）观察各处理组的生长发育情况，尤其是所研究生物学现象的典型性、代表性和重复性，从而在正式实验时保证取样的典型性、代表性和重复性。
风险2：生物样本的数不合理
       生物样本的数是指生物样本的种数，取决于处理组合数（含对照组）和取样间隔。处理组合数越多，取样间隔越短，生物样本的数就越多。而生物样本的数越多，准备生物样本和生化测定的综合成本（经费、时间和精力）就越高。
       生物样本的数合理是指：（1）能够反映代谢的变化过程，包括不同测定指标变化的先后，同一测定指标变化的拐点，从而明确代谢变化的关键指标；（2）适当降低综合成本，尤其是测定的综合成本。
       只有生物样本的数合理，才能保证生化测定数据的可用性，并显著降低综合成本。
       通过预实验，可以：（1）观察在不同处理中所研究的生物学现象出现情况，（2）找出最合适的处理，即典型性、代表性和重复性综合表现最好的处理，（3）从处理开始到出现所研究的生物学现象所需要的时间，从而在正式实验时：（1）只设置两种处理组合（对照组和处理组各一种），显著减少了处理组合数，例如与四种处理组合（对照组一种合处理组三种），生物样本数下降一半；（2）设置合理的取样间隔，例如把从处理开始到出现所研究生物学现象的所需时间五等分，既保证能够反映代谢变化过程，又不至于生物样本数过多。
风险3：生物样本的量不足
       生物样本的量，是指对照组和处理组每个重复每次取样的量，固体样本的克数，液体生物样本的毫升数，单细胞样本的百万数等。
       生物样本的量取决于测定总次数，即单次测定的需要量、测定重复次数和测定指标种数。
       量充足的生物样本，是顺利完成生化测定的保证。原则是“能取尽取，宁可备而不用，不可用而不备”。实际上应该准备理论需要量的至少1.5倍。
       在确定了测定指标种类和测定方法后，通过预实验，可以观察到对照组和处理组的生长发育情况，尤其是拟取样的组织、器官和个体，或者单细胞生物的生长发育情况，从而为正式实验时的培养规模提供参考，以确保在正式实验中有足够的样本可取。
风险4：生物样本保存和运输过程中变质
       在保存和运输过程中，一旦生物样本发生变质，尤其是拟测定指标发生显著变化，那么生化测定数据就变得不可靠了。
       生物样本一般需要低温保存和运输，即通过低温防止保存和运输过程中生物样本变质。因此，关键是控制好低温：（1）取样后就地液氮速冻，如果样本体积比较大，应该先行切分到适当大小后再速冻；（2）放置到超低温冰箱前分成小包装，一来便于在冰箱中好放置并在样本袋之间保持适当空隙，避免堆积堵塞通风，造成温度不均匀，二来避免测定前称量样本时多次取出样本而造成反复冻融，而引起样本变质；（3）密切注意冰箱管理，尤其是防止未发现停电造成样本融解后再冻结现象，以及其他人取出样本时冰箱门长时间打开，甚至翻找样本时把你的样本取出长时间放在室温下的情况；（4）运输时一定要保证样本始终处于低温中，用保温箱，并且在保温箱中放入足够的干冰或者冰袋。
       此外，样本标签很重要，一旦标签脱落或者模糊超过两个样本，则无法再核对，导致整批样本作废！建议：（1）双标签，即一个样本用两个样本袋，内层样本袋一个标签，外层和内层样本袋之间再放一个同样的标签，如果是样本管，则样本管上一个标签，样本管外再套一个样本袋，样本袋内放一个同样的标签；（2）双取样记录，即纸质实验记录表一份取样记录，电脑一份取样记录；（3）选用优质计号笔（不易因为水汽或者有机溶剂而模糊），或者用铅笔书写标签。
 
2. 生化测定阶段的风险
       生化测定的风险包括：（1）代谢类型没选准，（2）测定指标种类不合理，（3）测定方法不合适，（4）测定用品质量和性能不合格，（5）测定操作不规范、不到位，（5）未做好预测定，等等。
2.1 代谢没选准
       生化测定的目的：明确所研究的生物学现象与某种代谢的关系。
       如果没有选准代谢类型，那么测定数据将表明该代谢与所研究的生物学现象无关，严重降低生化测定的意义和发表高水平的研究论文。
       就已经获批的课题而言，申请人结合已有研究基础，经过精心推理，提出了研究假说，又经过专家两轮以上的评审，一般不会选错代谢类型，按计划执行就OK啦。但是，并不能完全排除选错代谢类型的可能，同时随着新文献和自己研究的进展，调整研究计划，甚至改选其他代谢，也是又可能的。因此，在制定研究方案时，还是有必要再次认真评估一下所选代谢类型！
2.2 测定指标种类不合理
       在选定代谢类型后，就需要选择测定的指标种类。
       合理的测定指标种类应该：（1）根据测定数据，能够得出明确、可靠的研究结论，即该代谢是否确实与所研究的生物学现象有关；（2）测定数据能够支撑起至少一篇高水平研究论文。
       因此，合理的测定指标种类应该集中选择该代谢已知的全部可测定指标，并且至少三种以上，包括物质含量、催化合成该物质的酶活性和催化降解该物质的酶活性。
       不合理的测定指标种类：（1）漏测了紧密相关的指标，导致无法得出明确、可靠的研究结论，也就不能发表高水平的研究论文；（3）测定指标种类过少，无法支撑起一篇高水平研究论文；（2）多测了无关指标，造成浪费，包括经费、时间和精力。
2.3 测定方法不合适
       确定了测定指标种类后，就需要建立合适的测定方法。
       只有合适的测定方法，才能保证测定顺利进行和测定数据真实、可用。
       合适的测定方法包括：（1）测定方法是否具备测定对象的专一性、测定数据的重复性和测定操作的简便性，（2）测定方法是否适合所测定的生物样本，（3）测定方法所需的测定用品，尤其是仪器设备，是否具备。
2.3.1 测定方法的专一性、重复性和简便性
       一种测定指标通常有多种测定方法。我们需要凭借丰富的测定经验，依次认真比较不同测定方法的专一性、重复性和简便性，从中选出2~3种测定方法。
       测定方法的专一性是指测定对象的专一性。测定对象的专一性是第一位的。如果测定对象不专一，即拟测定物质A的含量，测定方法却不能区分其类似物B或者衍生物C，把物质B或者物质C也当成物质A给测定了，这样测定到的物质A的含量就包含了物质B或者物质C，那么这样的测定数据是毫无意义的，并不能反映样本中物质A的真实含量。测定对象的专一性取决于：（1）测定原理，（2）测定前处理（提取和分离）。
       测定方法的重复性是指测定数据的重复性。测定数据的重复性是第二位的。如果测定数据重复性差，那么就会导致得出错误的差异显著性检验结论。这样的测定数据同样是没有意义的。测定数据的重复性包括样本重复性和技术重复性。样本重复性前面已经介绍了。技术重复性又包括：（1）测定方法的重复性，（2）测定用品的重复性，（3）测定操作的重复性。测定方法的重复性是反应体系的稳定性，尤其是pH和离子强度等。
       测定方法的简便性是指测定操作简便。测定操作简便性是第三位的。如果测定操作越烦，那么测定误差就越大，而且测定成本，尤其是时间和精力，就越高。如果测定操作越难，那么测定失败的可能性就越大，相应地对测定人员的要求也就越高。
2.3.2 测定方法是否适合所测定的样本
       生物样本具备成分复杂、未知成分多和拟测定物质含量或者酶活性变化范围大等特点。因此，在综合比较不同测定方法的专一性、重复性和简便性的基础上，还必须考虑测定方法是否适合拟测定生物样本！
       选择的测定方法是否适合拟测定的生物样本，在参考文献的基础上，只有通过测定实际样本，即预测定，才能最终确定该测定方法是否真正适合拟测定的生物样本。必要时对测定方法进行优化，甚至更换测定方法。
       只有适合拟测定生物样本的测定方法，才能保证测定顺利进行和测定数据可靠、真实和可用。
2.3.2 是否具备测定方法所需的测定用品
       每种测定方法都有所需要的测定用品，包括：（1）仪器设备，（2）试剂，（3）耗材。
       缺乏任何一种测定用品，测定都无法顺利进行。测定用品的质量和性能严重影响测定数据的真实性和可用性。
       与分光光度计相比，酶标仪具备两个优点：（1）测定数据重复性好，因为能够自动混匀和严格控制反应温度，（2）测定效率高，因为一次即可扫描整块酶标板，拿到数十个，甚至数百个测定数据。与手动匀浆相比，自动匀浆机具备两个优点：（1）匀浆效率高，因为一次能够匀浆十个样本以上；（2）匀浆程度一致，不像手动匀浆容易因为累或者认真程度变化，而造成不同样本的匀浆程度不一致，甚至差异巨大到掩盖不同样本中拟测定指标本身的差异。与手动进样相比，自动进样器具备两个优点：（1）解放了测定人员，不再需要测定人员守在液相色谱仪旁，（2）测定数据重复性好，显著减少了测定人员操作带来的误差。
2.4 测定用品质量或者性能不合格
       工欲善其事，必先利其器。测定用品质量或者性能不合格，也是导致测定不能顺利进行，或者测定数据不真实、不可用的重要原因。
       常见的包括：（1）仪器设备性能不稳定，（2）试剂纯度不够，（3）耗材质量差异大，或者被污染。
2.5 测定操作不规范或者不到位
       测定操作包括：（1）取样，（2）称量，（3）提取，（4）分离，（5）反应，（6）测定。
       规范是指严格按照说明书进行操作。到位是指操作确实实现了该操作的目的。测定操作不规范或者不到位，是测定不能顺利进行，或者测定数据不真实、不可用的最常见原因。
       例如，反应温度的控制。除了哺乳动物外，一般生物样本的酶活性测定要求在25^oC中进行反应。操作规范：打开酶标仪，并设定温度在25^oC。操作到位：由于目前酶标仪只具备加热功能，不具备制冷功能，如果实验室气温超过25^oC，就必须打开空调，先把实验室气温降低到20^oC左右；测定前提前打开酶标仪，设定温度在25^oC，预热至少0.5小时；测定前从冰箱中取出各种试剂，打开水浴锅，并设定温度在25^oC，立即把试剂瓶安全地放置到水浴锅中，待水浴锅显示温度稳定在25^oC后，就可以吸取各种试剂，加入酶标板各孔中。与操作规范相比，操作到位是要确保反应的实际稳定是25^oC。
       因此，测定人员必须：（1）弄清每一步测定操作的目的，（2）理解该步测定操作的原理，（3）判断该步测定操作是否确实实现了目的，才能确保测定操作的规范和到位。
2.5.1 称量时取样是否具有代表性
       一个样本需要测定多个指标，测定每个指标前通常都要称量该样本的一部分，即称量时取样。为了保证测定值能够真实地反映该样本的整体状况，就需要所取的部分样本具备代表性。否则不仅该指标的测定值不能代表样本的整体状况，而且容易造成不同测定指标的测定值相互矛盾。
       例如比较大的果实或者叶片，每次实际需要样本量0.2克。如何取样才能代表整个果实或者叶片呢？（1）沿着对称轴多次分割，直到其中一份接近0.2克；或者（2）简单分割后加液氮迅速粉碎成粉末，分装后再称量。
2.5.2 称量时温度控制是否严格
       低温保存的样本，在称量过程中也需要保持低温：（1）避免室温下拟测定指标发生显著变化，（2）避免室温下样本吸附水汽，造成称量不准确。
       通常把样本从超低温冰箱取出后置于冰上。但是要注意：（1）一次不要取出过多的样本，最好3~5个样本，能够在10分钟内称完，以免在室温中时间过长；（2）样本袋不要堆积在冰上，最好单层放置，以免上层样本迅速升温；（3）当初取样时就要小包装，避免同一袋样本多次取出和放回冰箱，造成反复冻融，样本变质。
2.5.3 提取时不同样本的匀浆程度是否保持一致
       在匀浆时，除了低温管理外，保证不同样本的匀浆程度一致是非常关键的。不同样本的匀浆程度不一致，是测定数据重复性差、差异不显著和变化不规律的重要原因。例如手动匀浆时由于手累，1号样本的细胞破碎程度是80%，而20号样本可能就只有60%，仅仅因为匀浆程度不同，就会造成重大差异。这就是我们推荐使用自动匀浆机的主要原因。
       生化测定时经常会测定样本的可溶性蛋白质含量，并以可溶性蛋白质含量作为分母，参与计算，尤其是酶活性测定时。因为可溶性蛋白质含量的高低，在一定程度上代表了样本匀浆程度（匀浆程度越高，从细胞中释放到提取液中的可溶性蛋白质越多），从而矫正了不同样本匀浆程度不同而造成的误差。但是该做法隐含了一个假设，即不同样本的可溶性蛋白质总量是一致的。但是事实上不同样本的可溶性蛋白质总量很可能差异比较大。另外，需要特别指出的是，计算样本酶活性时使用可溶性蛋白质含量，是对生化中酶活力的误用，并没有生理意义，还不如鲜重作为分母的生理意义恰当，因为酶毕竟是在细胞或者组织中发挥作用，与其在细胞或者组织中的浓度更加密切相关。
2.5.4 分离时温度控制是否到位
       常见的分离手段包括：（1）离心，（2）过柱。在分离过程中，尤其是离心时，为了保证酶不失活或者物质不降解，通常需要控制在低温中进行。
       与前述反应温度控制类似，在离心过程中同样需要对温度进行规范和到位的控制：提前打开离心机，并设定到所需温度，以确保离心时离心机腔和转子处于设定的低温中。
2.5.5 反应相关操作是否规范和到位
       主要包括：（1）临用前配制的试剂是否控制了时间，（2）加液顺序是否正确，（3）加液体积是否准确，（4）反应温度控制是否精准，（5）反应时间控制是否正确，（6）显色物质是否处在稳定期。
       之所以有些试剂需要临用前配制，主要是因为这些试剂不稳定，室温下易氧化失效。这就要求：（1）一次配制的量不要大，以免浪费；（2）在加液前半小时配制，不宜过早；配制后应该在两小时内用完。
       加液顺序是有要求的，应该严格按照说明书的顺序加各种试剂，以免反应不能正常进行。
       加液体积必须准确，否则测定数据就不会准确。移液枪的刻度调整和吸取时不能有气泡。最好使用排枪，能够有效减少加液体积的误差。
       反应温度的精准控制如前述，不再赘言。
       反应时间控制很重要：（1）反应时间直接参与计算的测定指标，反应时间控制不精准，直接影响计算结果；（2）从加完试剂，到上机开始读数的时间应该尽可能控制一致，如果不同样本上述时间间隔差异大，随着反应的进行，一方面底物和产物浓度在改变，另一方面在反应进行了不同时间段其反应曲线的斜率可能发生显著变化，严重影响测定结果。我们曾经碰到过，酶活性测定值严重偏低，接近于零。检查各种原因后，居然发现是因为酶活性特别高，在加完试剂到上机读数时，已经进入反应的平台期，即反应已经接近完成，吸光度几乎没有差异，只有微小的波动。
       显色物质是否处于稳定期也很重要。在显色物质稳定期外进行测定，测得数据就不真实：（1）在稳定期前测定，则测定数据偏低；（2）在稳定期后再测定，则测定数据同样偏低。
有一次，在用考马斯亮蓝测定可溶性蛋白质含量时，因为饿了，我在加完试剂后去吃了个饭，等吃完饭回来再上机测定时，发现吸光度都一样，只能重来。
2.6 预测定
       通过预测定，可以判断：（1）测定用品的质量是否可靠，（2）测定方法是否合适，（3）测定操作是否规范、到位，（4）样本的质量是否可靠。
       预测定情况：（1）测定能否顺利进行，（2）技术重复性好坏，（3）样本重复性好坏。
       根据上述预测定情况，进行全面分析。如果测定能够顺利进行，技术重复性好，样本重复性也好，那么就可以开始正式测定。
       如果测定不能顺利进行，原因可能是：（1）测定用品（仪器设备、试剂和耗材）质量不合格，尤其是试剂质量问题，有时是耗材质量问题，仪器设备质量问题比较罕见；（2）测定操作，漏加某种试剂了，加液顺序错了，临用前配制的试剂配制太早而变质了，比色皿或者酶标板选错了，样本变质导致酶失活了，等等。
       如果技术重复性差，原因是测定操作不规范和不到位：（1）样本称量不准确，或者未控制好称量的温度；（2）匀浆程度不一致，尤其是手动匀浆；（3）加液体积不准确；（4）反应条件，尤其是反应温度控制不严格；（5）开始反应到上机测定时间未严格控制，（6）从显色到测定时间控制不当，未在显色稳定的时间段内完成测定，早了显色不完成，晚了显色不稳定，等等。
       如果样本重复性差，原因是取样的重复性差。只能放弃这批样本，重新准备样本；或者增加测定的重复次数，以降低变异系数。
       此外，测定方法不合适也是常见的重要原因。鉴定测定方法是否合适，可以：（1）如果有标准品，即拟测定物质的标准品，或者拟测定酶活性的商业化酶，那么可以用标准品进行测定，看看测定数据，是否与标准品标签上标明的含量或者活性一致，重复性如何；（2）如果没有标准品，可以参考文献，选择含量或者活性比较高的新鲜样本（不一定是自己拟检测的样本，可以是文献报道的其它样本），来进行实际测定，以验证测定方法是否合适。
       做好预测定，才能确保：（1）正式测定顺利进行，（2）正式测定数据可靠、真实和可用。
 
3. 不同生化测定方式的风险
       现有生化测定方式有：（1）传统方式，即课题组自己完成确保生化测定工作；（2）试剂盒方式，即课题组购买试剂盒，在测定外包公司的支持下自己完成样本准备、预测定和正式测定；（3）代测方式，即课题组购买代测服务，课题组自己完成样本准备，其它工作全部由测定外包公司完成。其中试剂盒方式和代测方式属于测定外包。
       从测定效果、效率和综合成本综合衡量，试剂盒方式显著优于传统方式，而代测方式又显著优于试剂盒方式。
3.1 传统方式的风险
       如上所述，准备质可靠、数合理和量充足的生物样本，选择合理的测定指标，建立合适的测定方法，进行规范和到位的测定操作，通过预测定确保正式测定顺利进行和正式测定数据可靠、真实和可用，需要良好的测定条件和强大的测定能力。
       根据测定条件和测定能力，课题组可以分为改善型课题组和刚需型课题组。改善型课题组是指具备：（1）良好的测定条件，包括测定所需的仪器设备、试剂和耗材；（2）强大的测定能力，包括丰富的测定经验和端正的测定态度，从而能够按计划完成全部生化测定工作的课题组。刚需型课题组是指（1）测定条件差，尤其是缺乏测定所需的仪器设备，或者（2）测定能力差，尤其是不能顺利建立合适的测定方法，不能保证测定操作规范和到位，或者（3）缺乏足够的测定时间，尤其是快要结题或者毕业，从而不能按计划完成全部生化测定工作的课题组。
       改善型课题组可以选择传统方式。改善型课题组选择传统方式的优点在于：（1）全部测定工作都在课题组自己控制之下，对测定数据的质量比较放心；（2）节省经费。改善型课题组选择传统方式的缺点在于综合成本高，主要是时间和精力，降低了科研整体效率，从而难以在激烈的同行竞争中脱颖而出，百尺竿头再进一步。尤其是在需要测定新指标时，课题组将在建立合适的测定方法上花费很多时间和精力。
       与改善型课题组不同，刚需型课题组不适合选择传统方式。刚需型课题组，尤其是缺乏测定经验，将导致在建立合适的测定方法和保证测定操作规范、到位等方面，花费大量的经费、时间和精力，甚至因为测定反复失败，而不能按时结题和研究生顺利毕业。如此一来，刚需型课题组就几乎不可能在激烈的同行竞争中脱颖而出了。
3.2 试剂盒方式的风险
       相比传统方式，试剂盒方式的优点在于：（1）显著减少了测定的工作量，无需自己建立合适的测定方法和配制各种试剂；（2）显著降低了测定的难度，尤其是根据预测定情况优化或者更换测定方法的难度，因为测定外包公司提供预测定和正式测定的技术支持；（3）能够得到测定外包公司在选择合理的测定指标，准备质可靠、数合理和量充足的生物样本，全面分析正式测定数据等方面的建议，从而显著提高了课题组“轻松、及时拿到可靠、真实和可用的测定数据”的概率。
       相比传统方式，试剂盒方式的缺点：（1）课题组仍然需要需要自己完成预测定和正式测定，对于课题组的测定条件和测定能力有较高的要求；（2）测定外包公司不靠谱，（3）与测定外包公司沟通不到位，从而导致事倍功半，测定失败，甚至拿到假数据。
3.2.1 刚需型课题组误选试剂盒方式
       由于试剂盒方式需要课题组自己完成预测定和正式测定。因此，课题组必须具备：（1）测定所需的测定用品，包括仪器设备、耗材和自备试剂（易燃、易爆等不允许快递的个别试剂），（2）测定操作规范和到位。
       改善型课题组选择试剂盒方式，可以显著提高测定效率，而试剂盒费用又显著低于代测方式，性价比高。
       刚需型课题组不适合试剂盒方式，一旦误选试剂盒方式，很可能因为：（1）缺乏必需的测定用品，而不能顺利完成预测定；或者（2）无法保证测定操作规范和到位，而导致测定数据不真实和不可用，甚至测定不能正常进行。
       课题组应该根据自己的测定条件和测定能力，实事求是地决定是否选择试剂盒方式。尤其是向测定外包公司索要拟测定指标的说明书：（1）按照说明书中“所需仪器设备和自备用品”一栏，仔细核对测定所需用品，落实课题组是否具备所需的仪器设备、自备试剂和耗材，缺乏任何一种测定用品，试剂盒都无法正常使用；（2）按照说明书的操作步骤，实事求是地评估自己的测定能力，不要高估，如果测定操作不熟悉，无把握，就不要选择试剂盒方式。
       我司在11年的生化测定外包实践中，多次碰到课题组误选试剂盒方式，预测定无法顺利进行后被迫改选代测方式，从而浪费经费、样本和时间的情况。
3.2.2 测定外包公司不靠谱
       毕竟生化测定是专业的事，而专业的事就得专业的人或者公司才能做好，因此在选择试剂盒方式完成生化测定时课题组必须与靠谱的生化测定外包公司合作，才能轻松、及时拿到可靠、真实和可用的生化测定数据。
       靠谱的生化测定外包公司必须具备：（1）强大的专业能力，尤其是丰富的自主研发经验和测定外包经验，否则课题组为什么要与其合作；（2）良好的诚信记录，尤其是老用户的口碑，否则课题组怎么敢与其合作；（3）巨大的失信代价，否则测定外包公司怎么能约束住失信的冲动。
       不靠谱的生化测定外包公司常常有下列表现：（1）虚假宣传，（2）故意误导，（3）诱之以利。尤其是通过竞价排名、打折促销和送礼品等来骗单。
       作为课题组要避免被不靠谱的生化测定外包公司骗单，需要注意：（1）不随意，随便搜索一下，看到排名前几名的公司，就选择其作为合作对象，那么你就落入了“竞价排名”的陷阱；（2）不轻信，有些测定外包公司把网站做得特别炫，给用户大包大揽的承诺，有些经销商也出于自己的短期利益，而配合进行虚假宣传，其实是哪家测定外包公司给的折扣大，就极力向课题组推荐哪家；（3）不贪小利，牢记课题组的核心和长远利益是“轻松、及时拿到可靠、真实和可用的测定数据”，以优质结题和顺利毕业，而不是一点折扣和礼品，很简单，为什么要打折和送礼品，不就是因为试剂盒和代测质量不行，或者在用户中缺乏良好的口碑，而不得不通过打折和送礼品吸引课题组购买吗？
3.2.3 与测定外包公司沟通不到位
       在选择试剂盒方式和合作测定外包公司后，决定测定成败的就是与测定外包公司的沟通了。
       通过与测定外包公司主动沟通，课题组：（1）明确自己是否适合试剂盒方式，（2）如何准备质可靠、数合理和量充足的生物样本，（3）确定合理的测定指标，（4）如何进行预测定，（5）就预测定情况判断样本质量、试剂盒质量和测定操作是否规范到位，（6）是否有必要优化甚至更换测定方法，最终确定正式测定的测定方法和测定指标，（7）如何全面分析正式测定数据是否可靠、真实和可用等。
       最关键的是：（1）及早咨询，在准备生物样本前就主动咨询，包括测定方式、测定指标和样本准备等；（2）如实沟通，包括样本情况、测定条件、测定能力和预测定情况，尤其是预测定的原始数据；（3）友好协商，尊重科学，实事求是，以真正解决问题为原则，而不是扯皮和推诿。
3.3 代测方式
       相比试剂盒方式，代测方式的优点是：（1）测定工作量进一步显著减少，课题组只要准备样本，连预测定和正式测定都不用自己做了；（2）测定难度降低到零，课题组既不需要具备相应的测定条件和测定能力，也不需要根据预测定情况判断样本质量、试剂盒质量和测定操作是否规范到位，尤其是不需要根据预测定情况优化或者调整测定方法；（3）测定效果更加有保证，测定效率进一步大幅提升。
       相比试剂盒方式，代测方式的缺点：（1）测定完全由测定外包公司完成，课题组无法控制测定质量，只能取决于测定外包公司的诚信；（2）测定费用增加。
3.3.1 代测方式适合于所有课题组
       如果说试剂盒方式只适合于改善型课题组，那么代测方式不仅适合于改善型课题组，毕竟测定效率更高，而且是刚需型课题组的唯一选择，因为测定难度降低到了零。
3.3.2 测定外包公司不靠谱
       与试剂盒方式相比，代测方式对测定外包公司要求更高，尤其是其测定能力和诚信记录。
3.3.3 与测定外包公司沟通不到位
       相比试剂盒方式，代测方式同样要求课题组与测定外包公司沟通到位，只是沟通量要少一些，课题组不再需要就预测定情况与测定外包公司反复沟通，只要及时、认真审查测定外包公司提供的预测定数据即可。
 
       纸上得来终觉浅，绝知此事要躬行。您能耐心读到这里，应该已经厘清了生化测定及其外包的主要风险了。但是知易行难，要在生化测定及其外包的实践中真正控制好上述风险，还需要您：（1）始终牢记生化测定及其外包的真正目的，即“轻松、及时拿到可靠、真实和可靠的生化测定数据”，（2）根据自己的测定条件和测定能力，选择合适的测定方式，（3）选择靠谱的测定外包公司，（4）及早咨询、如实沟通和友好协商，发挥各自优势，做好应该也只能自己完成的工作，相互配合，即“不随意、不轻信和不贪小利”。
       今天是我司成立11周年纪念日。在我司11周年庆之际，我代表我司全体员工和经销商，预祝：课题组老师优质结题，成功申请到新课题，升职加薪；课题组研究生顺利毕业，找到满意的工作！
题外话：
1. 本文是我司对从事生化测定外包11年的经验和教训的总结和思考，欢迎各位读者来函批评指正（邮箱sdzlc2008@126.com）。
2. 如果您认为有一点参考价值，敬请分享给您的同事、同学和朋友。
3. 欢迎友商引用，大家一起努力提升生化测定外包质量，帮助广大课题组“轻松、及时拿到可靠、真实和可用的生化测定数据”，为我国生命科学研究尽微薄之力。